微生物無菌室靜壓差和微生物的測定

微生物無菌室需要檢測的項目有多個，本文主要介紹了靜壓差和微生物測定方法。

1.微生物無菌室靜壓差的測定

維持微生物無菌室的靜壓差在規(guī)定的范圍內(nèi)，可以有效控制無菌室的污染。通常所說的正壓潔凈無菌室和負(fù)壓潔凈無菌室，其實是反映它與相鄰空間的壓力差△P，如果△P>0，該潔凈無菌室就是正壓潔凈無菌室；若△P<0，則為負(fù)壓潔凈無菌室。所以潔凈無菌室的絕對靜壓沒有太大意義，我們要控制的是潔凈無菌室與相鄰潔凈無菌室或室外的壓力差。

(1)檢測要求

1)靜壓差的檢測須在潔凈區(qū)內(nèi)的所有門全部關(guān)閉的情況下進(jìn)行。

2)測試順序應(yīng)在潔凈無菌室平面上由潔凈度高的潔凈無菌室到潔凈度低的潔凈無菌室(或走廊)依次進(jìn)行，一直檢測到直通室外的房間。

3)測管口應(yīng)設(shè)在潔凈無菌室內(nèi)沒有氣流影響的地方，測管口平面應(yīng)與氣流方向平行。

(2)測量儀器

采用YJB-150補(bǔ)償微壓計(量程0~1500Pa)或微差壓力計，儀器靈敏度由被測環(huán)境壓差控制精度而定，宜小于0.1Pa，規(guī)范要求靈敏度不應(yīng)低于2.0Pa。

(3)測試方法

1)關(guān)閉所有的門。

2)用微差壓力計，根據(jù)預(yù)先設(shè)計的測定順序測量各潔凈無菌室之間，潔凈無菌室與潔凈走廊間，潔凈無菌室與非潔凈無菌室之間及非潔凈無菌室與室外之間的壓差。

3)把上述所測數(shù)值分別標(biāo)注在已畫好的測試平面圖上。

(4)合格標(biāo)準(zhǔn)

按上述測試平面圖所標(biāo)注的壓差數(shù)據(jù)，分別與設(shè)計或工藝要求的壓差值對比。若實測壓差大于或等于要求的壓差值，則判定為合格；但實測壓差值不宜超出標(biāo)準(zhǔn)要求的壓差太多，否則會產(chǎn)生噪聲且影響開關(guān)門，嚴(yán)重時還會在開關(guān)門時影響氣流組織。

2.微生物無菌室的微生物測定

空氣中懸浮微生物的測定方法有空氣懸浮微生物法和沉降微生物法兩種，也即通常所說的浮游菌和沉降菌檢測法。浮游菌檢測法是利用采樣器收集懸浮在空氣中的微生物粒子于專門的培養(yǎng)基上；而沉降菌測試方法，是采用直徑為90mm的培養(yǎng)皿，在采樣點上利用自然沉降原理沉降30min進(jìn)行采樣。把采樣后的基片(或平皿)經(jīng)過恒溫箱內(nèi)37℃、48h的培養(yǎng)生成菌落后進(jìn)行計數(shù)。使用的采樣器皿和培養(yǎng)液須進(jìn)行滅菌處理，采樣點可均勻布置或取代表性地點布置，浮游菌法采樣點數(shù)可與測定空氣潔凈度測點數(shù)相同。采樣時間應(yīng)根據(jù)空氣中微生物濃度來決定，沉降菌法的較少培養(yǎng)皿數(shù)應(yīng)符合《通風(fēng)與空調(diào)工程施工質(zhì)量驗收規(guī)范》GB50243 - 2002 中表B.5.2的規(guī)定。中凈環(huán)球凈化可提供微生物實驗室、無菌室的咨詢、規(guī)劃、設(shè)計、施工、安裝改造等配套服務(wù)。

微生物檢測前，潔凈無菌室須處于正常運行狀態(tài)。其溫濕度、風(fēng)量、風(fēng)壓及風(fēng)速須控制在規(guī)定值內(nèi)；被測試的潔凈室已滅菌，測試人員不得超過2人，須穿潔凈工作服。采樣前，凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行時間：對于單向流潔凈室(ISO-5級)不得少于10min；對于非單向流潔凈室不得少于30min；工作區(qū)采樣點位置距地面0.8~1.5m，根據(jù)需要可在關(guān)鍵部位增加采樣點。

(1)檢測方法

1)沉降菌測試方法

A.把直徑90mm注入培養(yǎng)基的平血(確保無菌)放在測點處，開蓋暴露(把皿蓋輕輕搭在皿邊上，不得影響采樣) 30min 后，用手指輕推搭在培養(yǎng)皿邊上的皿蓋，將其蓋好，放入培養(yǎng)皿專用容器中。若培養(yǎng)皿放置密度較大，在蓋蓋時應(yīng)先蓋近處、后蓋遠(yuǎn)處的培養(yǎng)皿，以防蓋蓋操作造成對培養(yǎng)皿的污染。

B. 把培養(yǎng)皿放入37℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h，然后用肉眼計菌落數(shù)(CFU)，再用放大鏡檢查是否有遺漏。

2)浮游菌的檢測

A.對采樣器、培養(yǎng)皿進(jìn)行嚴(yán)格滅菌，采樣口及采樣管在使用前須高溫滅菌。

B.測試人員應(yīng)穿潔凈工作服。

C.開動真空泵抽氣，時間不少于5min，使儀器中的殘余滅菌劑蒸發(fā)，然后調(diào)好流量及轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速。

D.關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)皿(雙手須滅菌處理)，蓋好蓋子后調(diào)節(jié)采樣器。

E.置采樣口于采樣點后，依次開啟采樣器、真空泵，根據(jù)采樣量選定采樣時間。

F.全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿放入37°C恒溫箱中培養(yǎng)48h，然后用肉眼計菌落數(shù)，再用放大鏡檢查是否有遺漏。

(2)合格標(biāo)準(zhǔn)

計算被測潔凈無菌室的浮游菌平均濃度C，等于被測潔凈無菌室總菌落數(shù)(CFU)除以總采樣量(m³)。

在生物潔凈室中，食品、生物制品的生產(chǎn)環(huán)境所要求的浮游菌菌落數(shù)及潔凈度由相關(guān)規(guī)范給出，由C值來評定生物潔凈室是否達(dá)標(biāo)，若C值≤規(guī)定浮游菌菌落數(shù)，則達(dá)標(biāo)。

沉降菌的平均菌落數(shù)按下式計算

M=（M₁十M₂+...+M_n） /n

式中M---被測潔凈無菌室沉降菌平均菌落數(shù)，CFU/皿；

M₁十M₂+...+M_n--- 1號、2號、..n號培養(yǎng)皿的菌落數(shù)；

n---培養(yǎng)皿總數(shù)。

若M≤規(guī)范或工藝要求的沉降菌菌落數(shù)，則被測潔凈無菌室的微生物達(dá)到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。否則應(yīng)查找原因，進(jìn)行滅菌，規(guī)范測試操作，重新測試。

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